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热启动 PCR 技术的优势

人阅读 发布时间:2022-09-23 15:42

聚合酶链式反应(PCR)由 1983 年美国 Mullis 首先提出设想,到至今,PCR 已发展到第三代技术。

​PCR 扩增流程图:

在传统的 PCR 反应中,利用冰上配制反应体系,来尽量避免 Taq 酶在常温有部分活性的问题,来解决引物错配和二聚体引起的非特异性扩增等现象,但是无法完全解决非特异性产物,造成实验结果的不准确性。热启动型 PCR 能够很好的解决上述问题,是最常用的提高 PCR 特异性的方法。

热启动 PCR(hot start PCR) 是指 DNA 聚合酶只有在样品温度至少超过 70℃ 时才发挥作用的 PCR。通过这种方式控制 PCR 反应的必须组分 DNA 聚合酶,直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后,再启动 PCR 达到有效扩增特异性 PCR 产物的目的。


抗体法修饰热启动酶原理图:

热启动 PCR 的应用方面较为广泛,不仅有效防止非特异性 PCR 产物,而且在较难扩增的 PCR 反应如单拷贝基因的扩增、多重 PCR 和超长片段的扩增等应用尤为突出,大大改观了传统 PCR 技术的局限性。在病原微生物检测、遗传病诊断和法医鉴定等各个领域等实际应用中颇为广泛。在应对全球爆发的新冠疫情方面,热启动酶亦贡献颇多。目前市面上应用于 SARS-Cov-2 的一步法 RT-qPCR 检测试剂的核心酶基本都是抗体法热启动酶。
 
 NOW!自 2022 年 9 月起,东盛生物 PCR 预混液系列产品全新升级至热启动版本,产品性能显著提升!欢迎试用体验!(常规 PCR Mix, #P2011/P2012/P2013/P2014/P2015保持普通版本)
 
东盛一管式 PCR 预混液不仅使用方便,而且性能优异,通过抗体修饰的热启动改造进一步提升了产品的特异性和扩增效率等性能。


部分产品升级对比图

高保真 PCR--Pfu Mix——在保证保真度的基础上显著提高 PCR 扩增效率:
 
高效率 PCR--Plus Mix——在原有高扩增效率的基础上进一步提高特异性:
 

染料法 qPCR Mix ——抗体修饰升级,曲线更完美:
 

东盛生物专注研发与生产 PCR 相关产品 17 余年,客户遍布海内外 40 多个国家和地区,产品涵盖 DNA 聚合酶、PCR 预混液、荧光定量 qPCR 预混液、一步法 RT-qPCR 预混液等产品,不仅可用于生命科学基础研究,而且可作为核心工业原料赋予各类分子诊断产品精准的检测能力。

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